RIPA 裂解液用于样品总蛋白提取已经有三十多年的时间，但是他到底适不适合你的下游实验，这个事你考虑过吗？比如 RIPA 提到的蛋白图谱是否完整？ 和其他方法对比提取的蛋白有哪些差异？使用时有没有潜在问题？一句话：RIPA 到底靠不靠谱？

最近看到几篇文章里是这么说的。

1

（Zapata et al., （1998）. J Biol Chem 1998, 273:6916-6920.）

➤ 研究方法

1. 分别使用 RIPA 和 2%SDS+超声提取未激活 T 淋巴细胞（Lanes 1 和 5）和激活的 T 淋巴细胞（Lanes 2-4 和 6-8）裂解细胞提取总蛋白

   
   

2. WB 进行 caspase-3, caspase-7, parp and GD1 活性检测

➤ 主要发现

p24, p20 存在于 RIPA 提取的蛋白中，但 Laemmli 裂解液提取的蛋白中却不存在。证明了 RIPA buffer 提取蛋白时会人工激活 caspase-3 and caspase-7。

划重点：细胞凋亡研究时要慎用RIPA

2

 

（Deseau et al., （1987）. J Cellular Biochem 1987, 35:113-128）.

➤ 研究方法

1. 培养的结肠癌细胞分别使用 RIPA 和 NP-40 提取

   
   

2. 用特异性单克隆抗体进行免疫共沉淀

   
   

3. 使用同样量 pp60-src 沉淀蛋白进行激酶检测

➤ 主要发现

1. 使用 RIPA 提取蛋白，激酶活性比 NP-40 提取高了七倍

   
   

2. RIPA buffer 人工增加激酶活性

划重点：激酶活性检测时要慎用RIPA

3

 

（Courtesy of G. Szanda,NIH/NIAAA/LPS）

➤ 研究方法

1. 研究使用化学诱导和无诱导的人细胞系，总蛋白分别使用 RIPA 和柱式法蛋白提取

   
   

2. 蛋白通过 SDS-PAGE 分离，进行 WB 检测磷酸化蛋白的对比

   
   

3. NT=细胞没有通过化学处理激活（基线水平），T=细胞通过化学激活处理。化学激活后，磷酸化蛋白（p）预期应比基线水平（NT）增加，非磷酸化蛋白（np）减少。

➤ 主要发现

1. 通过 actin 条带强度可以证明蛋白样品是等量上样

   
   

2. STAT3 在两种提取方法中显示了同样的趋势

   
   

3. P56 在两种提取方法中却显示明显的不同

   
   

4. 离心管柱法提取蛋白获得了预期的结果，但是 RIPA 获得了完全相反的结果

   

Mukhopadhyay, C. et al. （2016）. PNAS. 5: 8228-8237.

➤ 研究方法

1. 野生型和突变型乳腺上皮细胞通过 RIPA 裂解液裂解，通过离心获取 RIPA 可溶性和不可溶性组份

   
   

2. RIPA 不可溶性组份用 SDS-PAGE 样品缓冲液溶解，使用多种抗体进行验证

   
   

➤ 主要发现

1. RIPA 不可溶性组份中有明显的蛋白丢失情况

   
   

2. 野生型和突变型样品均有丢失蛋白，包括磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白（pY-416c-Src）

   
   

划重点：在某些蛋白质磷酸化研究中慎用RIPA

4

 

Lamber CM Ngoka （2008）. Proteome Science. 6:1 （1）.

➤ 研究方法

1. 使用 RIPA buffer 提取乳腺癌组织中总蛋白

   
   

2. RIPA 方法提取丢弃的不可溶性组份通过尿素裂解液再次提取蛋白

   
   

3. 通过质谱分析两部分蛋白质图谱

➤ 主要发现

1. RIPA buffer 提取后不可溶性组份中含有很多种蛋白

   
   

2. 几乎所有的细胞外基质蛋白都存在于不溶性组分中

   
   

   不溶性组分中蛋白质的分子量平均高出 60%

   
   

   RIPA 在 4 种乳腺癌样品提取中都产生了明显的蛋白丢失，主要是高分子量蛋白

   
   

   划重点：细胞外基质研究时慎用RIPA

5

 

BioTechniques 61:327 （December 2016）

➤ 研究方法

1. 小鼠组织样品分别使用离心管柱法和 RIPA buffer 提取总蛋白

   
   

2. RIPA 提取后不可溶组份进一步使用离心管柱法进行提取

   
   

3. 提取后的蛋白通过 SDS-PAGE 分离，考染进行对比

   
   

➤ 主要发现

1. RIPA 不可溶组份仍可以提取出蛋白，分子量从小于 20KD 到大于 120KD 范围，证明 RIPA 提蛋白有丢失

   
   

2. 最明显的区域是低分子量蛋白

   
   

3. 蛋白丢失是具有选择性，且不成比例的

   
   

4. 不同的样品间蛋白丢失的图谱是不同的

划重点：定量，定性蛋白研究慎用RIPA

What？看完一脸懵 X 吗？用了这么久的 RIPA 居然有这么多慎用，这也太不靠谱了，那该怎么办？

如果正在做以上实验研究遇到问题，那么务必要使用不同提取蛋白的方法来验证结果！有没有一种方法能够解决 RIPA 蛋白提取中的问题呢？

美国 Invent 公司带来的离心管柱技术，是蛋白提取的新方法，只需加入裂解液，过柱离心，不产生不可溶组份，1 分钟解决蛋白丢失问题。